Sắc ký lỏng là gì?
Sắc ký lỏng là quá trình tách xảy ra trên cột tách với pha tĩnh là chất rắn và pha động là chất lỏng (sắc ký lỏng - rắn). Mẫu phân tích được chuyển lên cột tách dưới dạng dung dịch. Khi tiến hành chạy sắc ký, các chất phân tích được phân bố liên tục giữa pha động và pha tĩnh. Trong hỗn hợp các chất phân tích, do cấu trúc phân tử và tính chất lí hoá của các chất khác nhau, nên khả năng tương tác của chúng với pha tĩnh và pha động khác nhau. Do vậy, chúng di chuyển với tốc độ khác nhau và tách ra khỏi nhau.
Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao là gì?
Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao là loại thiết bị dùng để thực hiện kỹ thuật phân tách các chất. Các chấy sẽ được phân ra thành nhiều loại khác nhau dựa trên thành phần và cấu trúc của nó. Nguyên lý hoạt động của thiết bị phụ thuộc vào các pha. Pha tĩnh là pha mà chất lỏng hoặc chất rắn được hỗ trợ dựa trên chất rắn. Pha động có thể bao gồm chất rắn hoặc chất lỏng tùy thí nghiệm.
Pha động chứa các thành phần hỗn hợp chất. Nó sẽ mang hỗn hợp đó đi qua pha đứng yên. Các thành phần của hỗn hợp sẽ có tương tác mạnh yếu khác nhau với pha tĩnh. Nghĩa là thành phần nào có tương tác yếu hơn thì sẽ di chuyển qua các cột chậm hơn. Nhờ đó mà chúng ta có thể phân tách hỗn hợp chất một cách đơn giản.
Việc phân tách này có thể thực hiện bởi nhiều pha tĩnh khác nhau. Do đó nó đã hình thành các loại sắc ký khác nhau. Và sắc ký lỏng hiệu năng cao là loại sắc ký lỏng cột nhưng được nâng cấp và cải tiến cao hơn so với các loại sắc ký lỏng cột khác.
Nhờ vào áp lực mà máy sắc ký lỏng hiệu năng cao tác động lên hỗn hợp chất mà việc phân tách được diễn ra nhanh chóng hơn các loại thiết bị khác rất nhiều. Về nguyên tắc cơ bản, chúng đều có hoạt động giống nhau. Sự phân tích ấy được thực hiện chủ yếu là dựa vào áp lực của các phần tử trong hỗn hợp có sự chênh lệch, khác nhau đối với lực hút của pha động và pha tĩnh.
Ứng dụng phương pháp HPLC là phương pháp rất phổ biến và được ứng dụng rộng rãi trong nhiều ngành khác nhau như: phân tích các hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, các chất phụ gia thực phẩm trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, môi trường…
Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao
Cấu tạo của hệ thống HPLC
Sơ đồ cấu tạo hệ thống HPLC
Cũng như tất cả các thiết bị sắc ký khác, thiết bị HPLC có thể hình dung gồm 3 phần chính:
- Phần đầu vào cấp pha động có thành phần mong muốn và mẫu phân tích.
- Phần tách: là phần trung gian của hệ sắc ký bao gồm cột tách, đôi khi có cột phụ trợ.
- Phần phát hiện và xử lí số liệu: phần này bao gồm các detector, phần khuếch đại, computer và phần mềm xử lí số liệu, bộ phận ghi tín hiệu.
Các loại detector trong HPLC
Detector là bộ phận quan trọng quyết định độ nhạy của phương pháp. Tuỳ thuộc bản chất lí hoá của chất phân tích mà lựa chọn detector cho phù hợp
- Detector quang phổ hấp thụ phân tử UV-VIS: áp dụng cho các chất có khả năng hấp thụ ánh sáng trong vùng tử ngoại (UV) hoặc vùng khả kiến (VIS).
- Detector huỳnh quang RF: sử dụng để phát hiện các chất có khả năng phát huỳnh quang. Đối với những chất không có khả năng như vậy, cần phải dẫn xuất hoá chất phân tích, gắn nó với chất có khả năng phát huỳnh quang hoặc chất phân tích phản ứng với thuốc thử để tạo thành sản phẩm có khả năng phát huỳnh quang.
- Detector độ dẫn: phù hợp với các chất có hoạt tính điện hoá: các ion kim loại chuyển tiếp…
Hệ thống sắc ký lỏng HPLC
Các bước tiến hành hiệu chuẩn máy sắc ký lỏng
Bước 1: Kiểm tra bên ngoài
- Kiểm tra bằng mắt để xác định sự phù hợp của sắc ký lỏng đối với các yêu cầu quy định trong tài liệu kỹ thuật về hình dáng, kích thước, chỉ thị, nguồn nuôi, ký nhãn hiệu, cơ cấu niêm phong của máy, tài liệu và phụ tùng đi kèm theo.
Bước 2: Kiểm tra kỹ thuật
- Kiểm tra trạng thái hoạt động bình thường của máy sắc ký lỏng theo hướng dẫn vận hành của máy.
Bước 3: Kiểm tra đo lường
- Kiểm tra độ chính xác tốc độ dòng
- Kiểm tra độ đúng bộ trộn dung môi
- Kiểm tra độ lặp lại của hệ thống
- Kiểm tra độ tuyến tính của hệ thống
- Kiểm tra độ tuyến tính của bộ tiêm mẫu tự động
- Kiểm tra nhiệt độ lò cột
- Kiểm tra độ nhiễu và trôi đường nền của detector
- Kiểm tra độ chính xác bước sóng detector
Xử lý chung
- Máy sắc ký lỏng HPLC sau khi hiệu chuẩn được dán tem hiệu chuẩn và cấp giấy chứng nhận hiệu chuẩn.
- Chu kỳ hiệu chuẩn máy sắc ký lỏng được khuyến nghị là 1 năm.
Quý khách có nhu cầu kiểm định, hiệu chuẩn thiết bị, vui lòng liên hệ theo địa chỉ:
Trung tâm Kiểm định Hiệu chuẩn Vùng 3
Địa chỉ: Số 69, đường số 8, phường An Khánh, Tp. Thủ Đức, Tp.HCM
Văn phòng GD và phòng thí nghiệm: Đường DX17, Phú Thọ, Phú Chánh, TX. Tân Uyên, Bình Dương.